葡萄糖-6-磷酸酶測(cè)試盒操作步驟

葡萄糖-6-磷酸酶測(cè)試盒操作步驟

產(chǎn)品說(shuō)明： 葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）是一種水解磷酸化合物的磷酸酶，廣泛存在 于動(dòng)物、植物、微生物和細(xì)胞中，是糖異生過(guò)程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保證血糖的動(dòng)態(tài)平衡方面起著重要的作用。

G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和無(wú)機(jī)磷，利用鉬藍(lán)法測(cè)定無(wú)機(jī)磷含量的增加，即可反映G6P活性。 

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。 

需自備的儀器和用品： 可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液qiang、研缽/勻漿器、EP管、冰和蒸 餾水。

 

樣本處理
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取 液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴， 功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）， 進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

3、血清（漿）樣本：直接檢測(cè)。